Skip to content

Zakrzepica z mutacji protrombiny, która przenosi oporność na antytrombinę AD 4

2 miesiące ago

393 words

Pisemną świadomą zgodę uzyskano od wszystkich uczestników badania. Wyniki
Analiza DNA
Analiza genomowego DNA dla probanda ujawniła, że była heterozygotyczna pod względem nowej mutacji missense w genie protrombiny (c.1787G . T, p.Arg596Leu) (Figura 1B). System numeracji nukleotydów i białek oparty jest na nomenklaturze zalecanej przez Towarzystwo Zmian Genomu Ludzkiego. 10 Ta sama mutacja została wykryta u jej matki i trzech innych członków rodziny z zakrzepicą żył głębokich, ale nie u bezobjawowego członka rodziny. Na niedopasowanej analizie PCR-RFLP amplikon traktowany PstI wykazywał pasmo 192-bp (zmutowany allel) i pasmo 212-bp (normalny allel). Potwierdziliśmy heterozygotyczność tej mutacji w probandzie, jej matce i trzech innych członkach rodziny z zakrzepicą żył głębokich, ale nie u bezobjawowego członka rodziny (Figura 1C). Nie wykryliśmy mutacji w próbkach pobranych od 100 Japończyków z prawidłowym fenotypem i 5 osób z niezdiagnozowaną zakrzepicą przed tym badaniem.
Rekombinowane protrombiny
Ustaliliśmy stabilne transformanty komórek HEK293 eksprymujących prototypowe i zmutowane protrombiny. Aby ocenić .-karboksylację rekombinowanych protrombiny, wykorzystaliśmy test ELISA do pomiaru poziomu protrombiny w pożywce hodowlanej po wchłonięciu siarczanu baru. Stwierdziliśmy, że zarówno protrombiny typu dzikiego jak i zmutowane zostały całkowicie wchłonięte, co sugeruje, że odpowiednia .-karboksylacja wystąpiła w obu preparatach (dane nie pokazane).
Funkcjonalne testy rekombinowanych protrombiny
Tabela 1. Tabela 1. Aktywność prokoobulantowa i amidolityczna rekombinowanych kostrombiny. Przeprowadziliśmy trzy oceny rekombinowanej aktywności protrombiny: jednoetapowe krzepnięcie, dwuetapowe krzepnięcie i testy chromogenne (tabela 1). Odtworzoną plazmę zastosowano we wszystkich testach. Wartości dla rekombinowanej protrombiny typu dzikiego wynosiły w przybliżeniu 100% we wszystkich testach. Zmutowana aktywność protrombiny w jednoetapowym teście była niższa niż w dwuetapowym teście. Zmutowana aktywność protrombiny w teście chromogennym była wyższa niż w teście dwustopniowym.
Formacja kompleksu trombina-antytrombina
Użyliśmy testu ELISA, aby określić, czy istnieje różnica między protrombinami typu dzikiego i zmutowanymi w tworzeniu kompleksów trombina-antytrombina. Rekombinowane protrombiny, które były aktywowane przez czynnik Xa inkubowano z antytrombiną, a tworzenie kompleksu trombina-antytrombina oznaczano za pomocą testu ELISA. W nieobecności heparyny, tworzenie kompleksu trombina-antytrombina przez protrombinę typu dzikiego wzrastało w sposób zależny od czasu. Jednakże, tworzenie kompleksu trombina-antytrombina przez zmutowaną protrombinę było prawie nieistotne przez pierwsze 30 minut (Figura 1D)
[podobne: usg tarczycy rzeszów, kokcydioza leczenie, honorowy dawca krwi przywileje ]