Skip to content

Zakrzepica z mutacji protrombiny, która przenosi oporność na antytrombinę AD 6

1 miesiąc ago

461 words

Znaleźliśmy nową mutację missense w genie protrombiny (p.Arg596Leu), która doprowadziła do powstania wariantu protrombiny (protrombiny Yukuhashi). W tej rodzinie mutacja ulegała koagulacji z zakrzepicą żył głębokich, co wskazuje, że może być przyczyną dziedzicznej trombofilii. Trombina, która jest aktywną postacią protrombiny, jest allosterycznym enzymem kontrolowanym przez wiązanie sodu. 15, 16 Trombina związana ze związkiem sodu (znana jako postać szybka) jest zoptymalizowana do prokoagulacji z powodu jej zwiększonej specyficzności wobec fibrynogenu, podczas gdy sód wolna trombina (znana jako powolna forma) jest antykoagulantem ze względu na zwiększoną swoistość do cięcia białka C. Mutacja zachodziła przy reszcie Arg596 (Arg221a w systemie numeracji chymotrypsynogenu17) w obrębie regionu wiążącego sód trombiny i spodziewano się, że ma wpływ na wiązanie sodu. Mutacja znajduje się również w jednym z miejsc wiązania antytrombiny, gdzie trombina jest inaktywowana przez antytrombinę z heparyną.18 Dwa egzopozyty na trombinie, pętli y i regionie wiążącym sód są krytyczne dla stabilizacji kompleksu trombina-antytrombina18 (ryc. S1A w dodatkowym dodatku). Dwa wodory bocznych łańcuchów trombiny Arg596 tworzą wiązania wodorowe z tlenem bocznego łańcucha antytrombiny Asn265 (ryc. S1B w dodatku uzupełniającym). Dlatego proponujemy dwie hipotezy: po pierwsze, aktywność prokozoporowa zmutowanej protrombiny jest nieco osłabiona; i po drugie, że tworzenie kompleksu z udziałem zmutowanej trombiny i antytrombiny jest upośledzone, co powoduje przedłużoną resztkową aktywność trombiny.
Aby przetestować pierwszą hipotezę, zbadaliśmy funkcje aktywacyjne i prokoagulacyjne rekombinowanych protrombin. Przygotowaliśmy odtworzone osocze przez zmieszanie plazmy z niedoborem protrombiny z rekombinowanymi protrombiny, ponieważ osocze probanda nie było odpowiednie do oceny z powodu leczenia warfaryną. Zaobserwowaliśmy, że zmutowane i typu dzikiego protrombiny zostały całkowicie przekształcone w trombiny w podobny sposób przez protrombinazy w ciągu 5 minut (ryc. S2 w dodatku uzupełniającym). Jednak konwersja zmutowanej protrombiny do trombiny okazała się być kilka sekund wolniejsza niż trombiny typu dzikiego w testach krzepnięcia. Ponadto zmutowana trombina prawdopodobnie miała niższą aktywność katalityczną dla fibrynogenu niż trombina typu dzikiego, która mogła być wynikiem strukturalnego rozerwania regionu wiążącego sód przez podstawienie Leu596 dla Arg. W poprzednim badaniu mutagenezy ze skanowaniem alaninowym trombina z mutacją Ala596 wykazała redukcję o czynnik 5 pod względem powinowactwa wiązania sodu, a jej aktywność prokoagulacyjna była podobna do wolnej formy trombiny.19 Podobne mechanizmy zakłóceń strukturalnych u mutanta Leu596 trombina mogła powodować niższą aktywność katalityczną fibrynogenu.
Aby przetestować drugą hipotezę – że zmutowana trombina byłaby wadliwa pod względem jej interakcji z antytrombiną – zbadaliśmy tworzenie kompleksu trombina-antytrombina przy użyciu testu ELISA
[hasła pokrewne: kabiny toaletowe, ortodoncja warszawa, ortodoncja łódź ]